細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。適用于人淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的無血清條件下的培養(yǎng)。可實(shí)現(xiàn)人淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的高密度培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如MEM)和添加劑(如血清或無血清培養(yǎng)用的某些確定的激素及生長因子)組成,培養(yǎng)基的配方一直在改進(jìn),其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等。
適用于人淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的無血清條件下的培養(yǎng)。可實(shí)現(xiàn)人淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的高密度培養(yǎng)。
(1)天然細(xì)胞培養(yǎng)基
天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。
目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。
(2)合成細(xì)胞培養(yǎng)基
合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。最早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。
最早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細(xì)胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。
(3)無血清細(xì)胞培養(yǎng)基
經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。
無血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達(dá)到既能滿足動物細(xì)胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。
(4)無蛋白無血清細(xì)胞培養(yǎng)基與化學(xué)組份限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基
①無蛋白無血清細(xì)胞培養(yǎng)基
這類培養(yǎng)基完全不含有動物來源蛋白,但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段,以及類固醇激素和脂類前體等,以替代動物激素、生長因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒有蛋白或蛋白含量極低,有利于生物制品的分離純化。
②化學(xué)組份限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基
此類培養(yǎng)基是目前最安全、最為理想的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基,所有成份的濃度都完全明確,即使其所添加的少量蛋白,也是可經(jīng)過純化處理,成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性,提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性,并有效降低了純化成本。
(5)個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基
嚴(yán)格意義上來說,個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基不在細(xì)胞培養(yǎng)基的傳統(tǒng)分類之列,其具體是指一類根據(jù)細(xì)胞特性、細(xì)胞培養(yǎng)工藝特點(diǎn)、使用者需求習(xí)慣而量身定制的細(xì)胞培養(yǎng)基,主要目的是提高細(xì)胞產(chǎn)率、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品安全性和降低血清的使用等。
(1)細(xì)胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水(經(jīng)石英蒸餾器蒸餾)或超純水,醫(yī)藥生產(chǎn)上一般為注射用水。
(2)建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用,因?yàn)榘b一旦打開,組分可能會變質(zhì)或因受潮而結(jié)團(tuán)。
(3)溶解干粉培養(yǎng)基時(shí)先加入終體積90%~95%的培養(yǎng)用水,添加劑加完后再補(bǔ)足。
(4)如需添加的組分較多時(shí),某一組分完全溶解后,再添加另一組分。
(5)待培養(yǎng)基完全溶解后再加入碳酸氫鈉,以免產(chǎn)生沉淀。
(6)所有成分完全溶解后,培養(yǎng)基應(yīng)立即過濾或高壓除菌,以免產(chǎn)生沉淀或有微生物污染。
(7)由于除菌過濾后,pH值可能會升高0.1~0.2個(gè)單位,因此在過濾前,可將pH調(diào)至比所需值低0.1~0.2個(gè)單位。
(8)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,建議不加或加少量的抗生素,如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應(yīng)降低一些。
(9)建議用1NHCl或1NNaOH來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,因?yàn)橛锰妓釟溻c調(diào)pH值對培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。
主要用于實(shí)驗(yàn)室。