細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。適用于人淋巴細胞、DC細胞、CIK細胞、LAK細胞等免疫細胞的無血清條件下的培養。可實現人淋巴細胞、DC細胞、CIK細胞、LAK細胞等免疫細胞的高密度培養。
細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。
由基礎培養基(如MEM)和添加劑(如血清或無血清培養用的某些確定的激素及生長因子)組成,培養基的配方一直在改進,其中包括抗生素和抗有絲分裂劑等等。
適用于人淋巴細胞、DC細胞、CIK細胞、LAK細胞等免疫細胞的無血清條件下的培養。可實現人淋巴細胞、DC細胞、CIK細胞、LAK細胞等免疫細胞的高密度培養。
(1)天然細胞培養基
天然培養基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養基,如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。其優點是營養成分豐富,培養效果良好,但缺點是成分復雜,來源受限且制作過程復雜、批間差異大。
目前廣泛使用的天然培養基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養某些特殊細胞也是必不可少。
(2)合成細胞培養基
合成培養基是根據天然培養基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計、配制的培養基。最早開發的基礎培養基。合成培養基是根據天然培養基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計、配制的培養基。
最早開發的基礎培養基,其本質為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養基被不斷開發出來。
(3)無血清細胞培養基
經歷了天然培養基、合成培養基后,無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。
無血清培養基,一般是在合成培養基的基礎上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達到既能滿足動物細胞培養的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。
(4)無蛋白無血清細胞培養基與化學組份限定無血清細胞培養基
①無蛋白無血清細胞培養基
這類培養基完全不含有動物來源蛋白,但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段,以及類固醇激素和脂類前體等,以替代動物激素、生長因子的作用。其特點是完全沒有蛋白或蛋白含量極低,有利于生物制品的分離純化。
②化學組份限定無血清細胞培養基
此類培養基是目前最安全、最為理想的無血清細胞培養基,所有成份的濃度都完全明確,即使其所添加的少量蛋白,也是可經過純化處理,成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養基較為理想地減少了生產的可變性,提高了生產工藝的重復性,并有效降低了純化成本。
(5)個性化細胞培養基
嚴格意義上來說,個性化細胞培養基不在細胞培養基的傳統分類之列,其具體是指一類根據細胞特性、細胞培養工藝特點、使用者需求習慣而量身定制的細胞培養基,主要目的是提高細胞產率、產品質量、產品安全性和降低血清的使用等。
(1)細胞培養用水一般為三蒸水(經石英蒸餾器蒸餾)或超純水,醫藥生產上一般為注射用水。
(2)建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用,因為包裝一旦打開,組分可能會變質或因受潮而結團。
(3)溶解干粉培養基時先加入終體積90%~95%的培養用水,添加劑加完后再補足。
(4)如需添加的組分較多時,某一組分完全溶解后,再添加另一組分。
(5)待培養基完全溶解后再加入碳酸氫鈉,以免產生沉淀。
(6)所有成分完全溶解后,培養基應立即過濾或高壓除菌,以免產生沉淀或有微生物污染。
(7)由于除菌過濾后,pH值可能會升高0.1~0.2個單位,因此在過濾前,可將pH調至比所需值低0.1~0.2個單位。
(8)在細胞培養過程中,建議不加或加少量的抗生素,如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應降低一些。
(9)建議用1NHCl或1NNaOH來調節培養基的pH,因為用碳酸氫鈉調pH值對培養液的滲透壓影響比較大。
主要用于實驗室。